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GelNest? 基質膠

GelNest?高濃度基質膠可適用于體內應用研究，如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高蛋白濃度同時可使GelNest?基質膠注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子的原位保持，便于用于原位分析和/或以后的切除。

GelNest?基質膠選用AccureVial?COP 瓶進行包裝運輸。環(huán)烯烴聚合物（COP）瓶作為中硼硅玻璃的替代品，具有極高的設計靈活性，其不易破碎的特點，也降低了物流運輸成本。

COP瓶優(yōu)勢：

★可耐受-196℃低溫儲存；

★較玻璃材質而言不易破碎；

★低蛋白吸附性；

★可耐受PH值>10的溶液，不易產(chǎn)生脫片，對基質膠進行安全性保護。

GelNest?高濃度基質膠可適用于體內應用研究，如制備厚層包被用于3D細胞培養(yǎng)。細胞可以嵌在GelNest?基質膠中或者接種在GelNest?基質膠表面（覆蓋法）。

是的。因為GelNest?基質膠在高于10℃的條件下即會開始成膠，我們推薦操作基質膠時使用預冷的移液管、吸頭和離心管。

GelNest?基質膠在10℃至35℃時會快速聚合成膠。

對于涉及顏色檢測的實驗，推薦使用無酚紅GelNest?基質膠，如使用熒光染料或Drabkins法計數(shù)內皮細胞成管實驗。對于子宮內膜細胞培養(yǎng)，也需使用無酚紅GelNest?基質膠。

此外，酚紅和非甾體雌激素結構類似，有類雌激素效應。在實驗動物體內可能具有干擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。

推薦使用中性蛋白酶或細胞回收解決方案來收獲培養(yǎng)在GelNest?基質膠中的細胞。中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白。對于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進行檢測的細胞，使用中性蛋白酶不會產(chǎn)生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。

對于代謝研究和RNA抽提，建議在4℃使用細胞回收解決方案進行非酶反應的細胞收集。因為GelNest?基質膠中含有痕量的RNA，進行RNA分析時，應設一個GelNest?基質膠（不接種細胞）的對照組。

其它從GelNest?基質膠中收獲細胞的方法：降低溫度至4℃-6℃使GelNest?基質膠解聚，需要一定的時間并且僅適合一部分應用。

包被過的培養(yǎng)皿最好當天使用，具體情況取決于實驗目的。

需要保存的情況下，可在37°C培養(yǎng)箱中最多存放7天。保存時GelNest?基質膠表面需要使用無血清培養(yǎng)基均勻覆蓋，保持濕潤。

薄膠主要用于輔助細胞貼壁，有利于細胞增殖。如原代細胞培養(yǎng)，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠。

厚膠主要用于3D細胞培養(yǎng)，如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結構（RingAssay），以及進行細胞侵襲實驗等。3D細胞培養(yǎng)實驗，主要是用于研究細胞與細胞間的相互作用以及復雜結構，如生物組織等。

進行該實驗，GelNest?基質膠最低濃度應不低于10mg/mL。

不同的實驗目的需要不同的GelNest?基質膠濃度，用戶應該根據(jù)具體的實驗需求確定。

GelNest?基質膠最低成膠濃度為7mg/mL。稀釋時不要簡單進行體積倍比稀釋，不同批次間的GelNest?基質膠濃度有差異，應該根據(jù)最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無血清培養(yǎng)基）的量。

用于體內研究的GelNest?基質膠，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應低于10mg/mL。

基質膠膠塊可以在體內維持至少一周的時間。

使用冰上預冷的無血清培養(yǎng)基或者PH=7.4的PBS。

推薦使用預冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時不要觸及瓶子底部；分液時切忌過快、用力過猛。

如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL時，應該吸取6mL，分液到移液管內仍有1mL時即停止；如果使用自動移液器（Pipetman），按壓到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進行分液。

基質膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL，基質膠會顯得非常厚重。

GelNest?基質膠產(chǎn)品在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度GelNest?基質膠不稀釋也可以直接使用，如用于培養(yǎng)腫瘤細胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內后，細胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀釋后，按照標準濃度的GelNest?基質膠產(chǎn)品使用方法使用，具體稀釋濃度根據(jù)實驗需求確定。

除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外，基質膠的狀態(tài)還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關。整個運輸過程中必須使用干冰冷藏。如果儲藏GelNest?基質膠的冰箱帶有自動除霜功能，冰箱除霜過程中升溫，可能使基質膠成膠。所以，切忌將GelNest?基質膠儲藏于此類冰箱中。

為保證GelNest?基質膠的使用效果，凍融次數(shù)應該盡可能減少。拿到新的GelNest?基質膠后，請按照單次用量進行分裝。每次融化操作，GelNest?基質膠都應該放置于冰上。

GelNest?基質膠是一種從小鼠腫瘤中提取的重組基底膜，新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層粘連蛋白，IV型膠原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。

這些蛋白構成了GelNest?基質膠的基本結構。在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價鍵可以結合，促使GelNest?基質膠形成凝膠。而在低溫條件（如4℃）下，由于沒有足夠的能量促使共價鍵結合，所以GelNest?基質膠呈現(xiàn)液體狀態(tài)。

建議用戶第一次融化后按照單次用量進行分裝，保存。

首先需要檢查細胞的接種濃度是否過高，GelNest?基質膠的用量應等同于細胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)基的用量。如果GelNest?基質膠被稀釋到過低的濃度，形成的膠體容易從組織培養(yǎng)器皿表面分離。

4℃下低速離心，去除沉淀物。

與細胞培養(yǎng)基或緩沖液混合過但未使用完的GelNest?基質膠，不建議保留再用。

是的。GelNest?基質膠可以儲存在-70℃。建議客戶將整瓶的GelNest?基質膠進行分裝，儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質的小管中，方便保存和使用。

GelNest?基質膠是一種蛋白混合物，所以GelNest?基質膠可能引發(fā)熒光的組分為蛋白質成分。如果需要使用熒光檢測細胞生長狀態(tài)，建議使用者建立對照實驗，在所需要的波長條件下進行對比，以便排除背景熒光。

可以使用2%濃度的多聚甲醛進行固定。為避免固定后出現(xiàn)解聚的情況，可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定劑，常用于電鏡觀察。

如果用戶需要進行免疫熒光檢驗，加入戊二醛后，會出現(xiàn)明顯的背景熒光。為了解決這一問題，我們建議用戶在固定之后，使用NaBH4進行淬滅。NaBH4極易產(chǎn)生氣泡，進行該步驟時，必須在水平操作臺上小心操作，避免晃動，盡量減少氣泡的形成。另外，用戶也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進行固定，如0.1%到0.5%，濃度越低，背景熒光信號越少。

因為二氧化碳和碳酸氫鹽緩沖液及酚紅的反應，冷凍或剛融解的GelNest?都有可能呈現(xiàn)不同顏色，顏色從稻草黃到暗紅色不等。

酚紅在冷凍或者酸性環(huán)境下呈現(xiàn)明黃色，在接近生理pH值或0oC以上呈現(xiàn)紅色。

GelNest?出現(xiàn)顏色上的區(qū)別是正常情況，不會影響產(chǎn)品質量，并且在和5%的二氧化碳平衡后，會恢復到統(tǒng)一顏色。