春節(jié)假期將至，對于科研人來說這可是又愛又恨：一個假期回來，原本生龍活虎的細胞瞬間“暴斃”。
那么導致這種情況的原因有哪些？
節(jié)前養(yǎng)細胞過程該注意什么？
NEST幫你劃重點！
幫細胞崽崽過龍年！
01細胞前期準備
細胞培養(yǎng)體系中最為重要的即為細胞培養(yǎng)基。常見的細胞培養(yǎng)方法便是90%基礎培養(yǎng)基（DMEM、1640、F12等）+10%胎牛血清。
盡管使用廣泛，但胎牛血清在細胞培養(yǎng)中面臨著諸多問題和風險。有研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基支原體污染中的牛萊氏無膽甾原體和精氨酸支原體來源于牛血清。
因此，胎牛血清的品質至關重要。
NEST選用南美烏拉圭血源，每一批血清的生產都受到嚴格的控制，從血清的收集和整個處理和生產的所有階段，按照符合歐洲法規(guī)進行處理，一直到最終包裝做到全程的質量控制。
NEST胎牛血清血源地證明
NEST胎牛血清無疫病證明
NEST胎牛血清官方原產地證明
此外，NEST每一批血清都會進行完善的檢測。
1. 支原體：每產品批次都要檢測有無支原體。通過培養(yǎng)方法檢測血清是否存在支原體。
2. 無菌性：產品均基于歐洲藥典或美國藥典進行無菌性檢測，確保無細菌、酵母、大腸桿菌噬菌體等。無菌過濾、無菌分裝，每生產批次中均會抽樣進行無菌測試。
3. 血紅蛋白：血紅蛋白具有氧化性，過高會導致細胞受損。采用分光光度計測量殘留血紅蛋白水平。
4. 細胞培養(yǎng)試驗：每批胎牛血清都被測試特定細胞系的體外培養(yǎng)效果。從細胞生長、鋪板效率、克隆效率三方面評判。測試細胞種類：HeLa，L929，SP2/0-AG14，MRC-5
選用指南
02細胞凍存操作
細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術。
凍存管一般用作低溫儲存，是常用的實驗耗材，多用于生物、醫(yī)藥、食品等行業(yè)。采用醫(yī)用聚丙烯(PP)為原料，在液氮氣相的超低溫環(huán)境下,可耐低溫至零下196℃。
耐思凍存管分常規(guī)無碼凍存管、二維碼凍存管和三碼合一SBS凍存管三種系列，具備完整的穩(wěn)定性與安全性驗證報告。
細胞在不加任何保護劑的情況下冷凍，細胞內外的水分會很快形成冰晶從而引發(fā)一系列的不良反應。
因此，細胞凍存液至關重要。
NEST細胞凍存液改良優(yōu)勢
選用指南
細胞凍存操作指南（排版的時候使用上下滑動查看文字的模板）
1. 貼壁細胞制備細胞懸液：(懸浮細胞請忽略此步驟)
(1) 將舊培養(yǎng)基吸除,用PBS清洗兩遍。
(2) 在培養(yǎng)瓶中加入少許胰酶,以能覆滿瓶底為限。將培養(yǎng)瓶平置于培養(yǎng)箱中消化約1~2分鐘,期間在顯微鏡下觀察,一旦發(fā)現(xiàn)細胞間隙增大、細胞變圓、比較松動后,立即終止消化(個別難消化細胞需要延長消化時間,但要避免消化過度)。
(3) 加入適量溫浴好的完全培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打均勻細胞。
2. 貼壁細胞和懸浮細胞的凍存：
(1) 取少量細胞懸液細胞計數,算出細胞總數和所需細胞凍存液的量。細胞的凍存密度以1×10^6~2×10^7 cells/ mL為宜。
(2) 將所需量的細胞懸液轉移至適當離心管中,200~500×g,離心3-5分鐘, 棄上清收集細胞。（離心速度和時間取決于細胞類型）
(3) 向細胞沉淀中加入適量無血清非程序細胞凍存液,用移液器輕輕吹打以重懸細胞,分裝于無菌細胞凍存管中,嚴密封口后,注明細胞名稱、代數、日期。
(4) 直接置于-80℃冰箱中儲存,細胞可至少保存一年;或者-80℃過夜后,次日將細胞投入液氮中長期儲存。
03細胞復蘇操作
1. 自液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存管,檢查蓋子是否旋緊,立即放入37℃水浴中快速解凍。(避免冰晶重新結晶而造成細胞死亡),輕搖凍存管使其在1~2分鐘內全部融化,以75%酒精擦拭凍存管外部,移入無菌操作臺內。
2. 將解凍的細胞懸液移至15mL無菌離心管中,再加入5~10mL預熱好的完全培養(yǎng)基,輕輕混合均勻,200~500×g,離心3-5分鐘,棄上清收集細胞。(離心速度和時間取決于細胞類型)
3. 加入預熱好的完全培養(yǎng)基,混合均勻,轉移到細胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注：可使用耐思新推出細胞復蘇儀替代原始細胞復蘇過程，預熱1分鐘，催融階段1分10秒左右，解凍復蘇階段大約1分20秒左右，解凍復蘇后細胞存活率高。
